Эритроцитарный коревой диагностикум

Эритроцитарный коревой диагностикум

Нифонтова Антонина Ивановна

вирусолог лаборатории детских вирусных инфекций Ин­ститута (с 1964 г.); к.м.н. (с 1975 г.); научный сотрудник отдела биотехнологического контроля Отдела новых технологий Института (до 2017 г.); житель блокадного Ленинграда

Антонина Ивановна Нифонтова родилась 24 мая 1937 г. в Ленинграде.

В 1960 г. окончила Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт, пройдя специализацию по особо опасным инфекциям в Ставропольском противочумном институте, а также курсы по микробиологии в Ленинградском ГИДУВ; 4 года работала на кафедре микро­биологии ГИДУВ врачом-микробиологом.

В 1964 г. поступила по конкурсу в лабораторию детских вирусных инфекций Ин­ститута, возглавляемую академиком А.А. Смородинцевым на должность вирусоло­га, где более 10 лет занималась изучением коревой и краснушной инфекций, участво­вала в испытании коревой, краснушной и ассоциированной краснушно-коревой-паротитной отечественной вакцины. Ею опубликованы 11 статей, написаны «Техниче­ские условия производства отечественной живой аттенуированной краснушной вакцины» в со­авторстве с академиком А.А. Смородинцевым, Л.М. Бойчук, и В.Н. Мешаловой.

В 1975 г. А.И. Нифонтова защитила кандидатскую диссертацию на тему «Биологические свойства и условия производственного обогащения вируса краснухи».

В 1975 г. перешла на работу на предприятие Института в цех живой коревой вакцины, где занималась контролем коревой, паротитной и ассоциированной паротитно-коревой вакцины; затем контролем инактивированной хроматографической гриппозной вакцины, разработанной профессором Э.А. Фридман; изучала ее реактогенные и иммуногенные свойства (награждена дипло­мом участника ВДНХ).

За время работы на предприятии участвовала в написании четырех регламентов производ­ства: живой коревой и краснушной вакцин, ассоциированной паротитно-коревой и инактивиро­ванной гриппозной вакцины. Является соавтором этих нормативных документов, а также авто­ром двух рациональных предложений, давших предприятию экономический эффект благодаря отмене до­рогостоящего контроля на пирогенность инактивированной гриппозной вакцины:

– определение биологической активности вирусов кори и паротита в ассоциирован­ном препарате на одной тканевой культуре (15.01.1977 г.);

– снятие теста пирогенности на кроликах из контролей инактивированной хромато- графической гриппозной вакцины (25.09.1980 г.).

В 1991 г. в цехе диагностических препаратов А.И. Нифонтовой был внедрен в производство новый отечественный препарат – краснушный диагностикум. Было выпущено 1000 комплектов этого препарата для практики здравоохранения.

В 1992 г. Нифонтова А.И. работала в отделе биологического контроля, являясь курато­ром внутрипроизводственного контроля лечебного препарата – бифидумбактерина, инактиви­рованной гриппозной вакцины, коревого эритроцитарного диагностикума, специфических им­муноглобулинов антистафилококкового, противоклещевого, противостолбнячного и нормаль­ного, а также 10% и 20% альбумина.

С 2004 по 2017 гг. А.И. Нифонтова работала в отделе новых технологий Института под руководством В.Н. Вербова в качестве научного сотрудника отдела биотехнологического контроля, контролирует выпускаемые отделом диски с противомикробными препаратами.

За многолетний добросовестный труд А.И. Нифонтова награждена памятной Пастеровской медалью, имеет благодарности руководства Института.

ДИАГНОСТИКУМЫ (греч, diagnostikos способный распознавать) — взвеси обезвреженных микроорганизмов, используемые в качестве антигенов для серологических реакций. Опасность работы с живыми культурами, их способность к изменчивости и наличие широких антигенных связей делают целесообразным применение Д.— более стандартных и гомогенных препаратов, содержащих определенные антигенные компоненты.

С помощью Д. в реакциях агглютинации, пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) и др. выявляют специфические антитела в сыворотках людей и животных с целью постановки диагноза и изучения иммунного состояния организма.

Особенно широко используют Д. в лабораторных исследованиях при кишечных инфекциях. Однако общность антигенной структуры кишечных бактерий обусловливает наличие перекрестных реакций и требует дифференцированного выявления антител. С этой целью проводят избирательное подавление отдельных антигенов: с помощью фенола или формалина подавляют О-агглютинабельность, как предложили Феликс и Олицкий (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Воздействуя спиртом по способу Вина и Зонтага или прогреванием по Кауффманну, получают O-диагностикумы с инактивированным жгутиковым антигеном. Еще более перспективно применение моно диагностикумов, принцип создания которых разработан Ф. Г. Бернгофом (1944). В этих препаратах содержится лишь один антигенный компонент, и они взаимодействуют только с определенными специфическими антителами.

Показана возможность сохранения свойств бактериальных Д. путем их лиофилизации (см.).

Д., применяемые для серодиагностики различных инфекций, принципиально сходны, однако отдельные виды этих препаратов имеют определенную специфику.

Общепризнано, что РПГА более чувствительна и специфична, чем бактериальная агглютинация. В качестве антигенов в РПГА применяют формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные антигенами, полученными по методам Буавена и Вестфаля.

Возможно также использование эритроцитарных Д. для выявления антигена в тканях, выделениях больных, экстрактах различных веществ и т. п. В этих случаях применяют эритроциты, сенсибилизированные антителами,— «антительные диагностикумы».

Вирусные Д. применяют в основном в реакции связывания комплемента (РСК), РТГА и реакции нейтрализации. Готовят их из вируссодержащих культуральных жидкостей, обработанных (инактивированных) различными способами.

Краткая характеристика основных Д. и сфера их применения представлены в таблице.

Имеются также экспериментальные препараты, используемые в научной работе: эритроцитарные колидиагностикумы, дифтерийные эритроцитарные Д., гемагглютинирующие антигены вирусов паротита, коревой Гемагглютинирующий антиген и др.

Читайте также:  Чем отличается крем от бальзама

Таблица. Краткая характеристика основных диагностикумов и цель их применения

Цель применения (используется сыворотка обследуемого)

Диагностикумы из бактерий семейства кишечных: шигелл Флекснера, Зонне, Ньюкасла; сальмонелл тифа (ОН, О), паратифа А и В, холеры су ис, тифимуриум, энтеритидис

Микробная взвесь (3 млрд. микробных тел в 1 мл), инактивированная 0,4—0,5% р-ром формалина

Постановка реакции агглютинации для уточнения клин, диагноза заболевания

Сальмонеллезные О-диагностикумы (2, 4, 7, 8, 9 и 3, 10)

Микробная взвесь, содержащая парциальный О-антиген (3 млрд. микробных тел в 1 мл),полученная из селекционированных штаммов, инактивированная 15% р-ром глицерина

Постановка реакции агглютинации для выявления О-антител при сальмонеллезах

Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы (а, b, с, d, eh, с, k, lv, gm, p, st и антигены второй фазы — 1, 2, 5, 6, 7)

Микробная взвесь, содержащая компоненты жгутикового антигена 1-й и 2-й фаз (3 млрд. микробных тел в 1 мл), полученная из селекционированных штаммов, инактивированная 0,5% р-ром формалина

Постановка реакции агглютинации для выявления Н-антител с диагностической целью и для установления заболевания в анамнезе

Микробная взвесь (3 млрд. микробных тел в 1 мл) из штаммов, содержащих Vi-фактор, обработанная 0,4% р-ром формалина и 0,6% р-ром хлорида кальция

Постановка реакции агглютинации для выявления брюшнотифозного бактерионосительства

Бруцеллезный единый диагностикум

Взвесь бруцелл в 12% р-ре поваренной соли, окрашенная в синий цвет и инактивированная 0,5% р-ром фенола

Постановка реакции агглютинации (реакция Райта и реакция Хаддлсона для выявления инфицированных людей и животных— см.Бруцеллез, методы исследования)

Микробная взвесь (25 млрд. микробных тел в 1 мл) вакцинного штамма, инактивированная 0,5% р-ром формалина

Постановка объёмно-капельной реакция агглютинации на стекле для серодиагностики и изучения иммунного состояния привитых

Лиофилизированная микробная взвесь 11 штаммов наиболее распространенных серотипов

Постановка РСК для подтверждения клин, диагноза заболевания

Корпускулярные антигены — взвесь риккетсий, выращенная в желточных мешках куриных эмбрионов или легочнориккетсиозный материал от зараженных грызунов, обработанный эфиром, целитом или при дифференциальном центрифугировании

Постановка реакции агглютинации для дифференциальной диагностики риккетсиозов

Эритроцитарные диагностикумы из шигелл Флекснера — Зонне

Формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные антигенами Буавена, Вестфаля и др.

Постановка РПГА для уточнения клин» диагноза дизентерии

Эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум

Формалинизированные эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеном

Постановка РПГА для выявления брюшнотифозного бактерионосительства

Эритроцитарные сальмонеллезные О-диагностикумы (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 и комплексный)

1% взвесь формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами Буавена, Вестфаля и др.

Постановка РПГА для уточнения клин» диагноза заболевания

Лиофилизированный туляремийный эритроцитарный диагностикум

Формалинизированные лиофилизированные эритроциты, сенсибилизированные туляремийным антигеном

Постановка РПГА для уточнения клин., диагноза туляремии, а также реакции нейтрализации антител для обнаружения: антигена

Антиген вируса осповакцины

Сухой препарат живого вируса осповакцины, культивированного на хорион-аллантоисной оболочке куриных эмбрионов

Постановка РПГА для выявления антигемагглютининов у больных и привитых

Аденовирусный специфический антиген

Готовят культивированием вируса 6 типа в культуре перевиваемых клеток А-1 (антиген, общий для всех аденовирусов)

Постановка РСК для выявления комплементсвязывающих антител в сыворотке больных

Диагностикумы клещевого энцефалита и этиологически сходных с ним заболеваний

Вируссодержащая суспензия мозга белых мышей, осветленная путем центрифугирования и инактивирования бета-пропилактоном

Постановка РСК и РТГА для уточнения клин, диагноза заболевания

Сухой препарат из кипяченых вируссодержащих желточных мешков куриных эмбрионов, экстрагированных эфиром, осажденных ацетоном и инактивированных мертиолатом

Постановка РСК для диагностики орни-тоза людей, птиц и животных

Гриппозный диагностикум сухой

Аллантоисная жидкость развивающихся куриных эмбрионов, инфицированных одним из штаммов вируса гриппа типа А, В или С, инактивированная формалином, мертиолатом. В связи с изменчивостью антигенной структуры вируса гриппа предусмотрена частая смена производственных штаммов

Постановка РТГА для уточнения клин., диагноза заболевания

Парагриппозный диагностикум типа 1, 2, 3 для РТГА, сухой

Культуральная жидкость (почки эмбриона человека), содержащая один из штаммов вируса парагриппа, обработанная твином-80, эфиром и мертиолатом

Постановка РТГА для уточнения клин, диагноза заболевания

Библиография: Зуев А. С. Бактериальный vi-диагностикум для выявления хронических носителей брюшнотифозных бактерий, Журн, микр., эпид, и иммун., № 2, с. 51, 1959, библиогр.; Зуев А. С., Новоселова А. И. и Ликина И. В. Разработка методики производственного изготовления О-диагностикумов и Н-монодиагностикумов и применение их при серодиагностике салмонеллезов, там же, № 3, с. 42, 1956; Иммунология и профилактика кишечных инфекций, под ред. С. И. Диденко, с. 180, М., 1962; Каральник Б. В. Эритроцитарные диагностикумы, М., 1976; Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 172, М., 1973; Субботина Ю. Л. и д р. Серологическая диагностика сальмонеллезов и антигенные связи в реакциях с эритроцитарными и бактериальными О-диагностикумами, Журн, микр., эпид, и иммун., № 3, с. 19, 1970, библиогр.

Читайте также:  Цнс строение головного мозга таблица

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/06287 от 15.08.2011 г.

Диагностикум эритроцитарный коревой антигенный сухой для реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) представляет собой 3 % акролеинизированные, танизированные бараньи эритроциты, сенсибилизированные дезинтегрированным коревым антигеном.

В состав набора входит:

  • диагностикум эритроцитарный коревой (КЭД) антигенный сухой 3 % — 5 фл. по 2 мл;
  • сыворотка кроличья нормальная (НКС) сухая 10 % — 5 фл. по 2 мл;
  • эритроциты барана, акролеинизированные или формалинизированные несенсибилизированные (суспензия 30 %), − 1 фл. 3 мл;
  • иммуноглобулин человека нормальный жидкий — положительный контрольный образец коревых антител с титром антител 1:320 – 1:1280, соответствующим 50 МЕ/мл, − 1 амп. 1,5 мл.

Указанные реагенты упакованы в картонную коробку вместе с инструкцией по применению.

Один набор рассчитан для исследования 90 сывороток, не считая контролей.

Назначение

Выявление антител к вирусу кори в сыворотках крови людей и в препаратах иммуноглобулина человека.

Способ применения

Диагностикум применяют в реакции пассивной гемагглютинации.

Для постановки реакции дополнительно требуются следующие материалы и оборудование:

  • дистиллированная вода;
  • раствор натрия хлорида, 0,9 %, рН 6,6 — 7,2;
  • спирт этиловый ректифицированный технический;
  • пипетки одноканальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пипетки 8- или 12-канальные для подачи жидкостей на 5 — 40 мкл, 40 — 200 мкл;
  • наконечники полипропиленовые на 5 — 200 мкл, 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
  • пробирки центрифужные полипропиленовые или стеклянные вместимостью 10,0 мл;
  • мерные стаканы вместимостью 50,0 – 100,0 мл;
  • ванночки для реагентов или стеклянные чашки Петри;
  • планшеты полимерные для иммунологических реакций однократного применения с лунками вместимостью 0,20 — 0,25 мл и U-образным дном;
  • спиртовка СЛ−1 или СЛ−2;
  • бумага фильтровальная листовая для просушивания.

Приготовление растворов для постановки реакции пассивной гемагглютинации

Приготовление рабочего 1 % раствора НКС

Для разведения диагностикума, испытуемых сывороток и иммуноглобулина человека используют 1 % раствор НКС.

Во флакон с НКС вносят 2,0 мл дистиллированной воды и выдерживают при температуре от 16 до 25 °С в течение 1 мин. — получают 2,0 мл 10 % НКС. Затем 10 % НКС разводят в 10 раз 0,9 % раствором натрия хлорида — получают 1 % раствор НКС. Например, к 18,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида добавляют 2,0 мл 10 % раствора НКС.

Допускается хранение неиспользованного 10 % раствора НКС при температуре от минус 8 °С до минус 12 °С в течение 2 недель. 1 % раствор НКС хранят при температуре от 2 до 10 °С в течение 1 сут. Плохо растворившуюся сыворотку для реакции не используют.

Приготовление рабочей 1 % суспензии КЭД

Во флакон с диагностикумом добавляют 2,0 мл дистиллированной воды. В течение 1 мин. образуется гомогенная коричневая 3 % суспензия, которую оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч для гидратации. При отстаивании образуется 2 слоя: прозрачная или слегка опалесцирующая надосадочная жидкость светло-желтого цвета и осадок коричневого цвета, разбивающийся при встряхивании. Для получения рабочей 1 % суспензии 3 % суспензию диагностикума разбавляют в 3 раза 1 % раствором НКС. Например, к 2,0 мл 3 % суспензии КЭД добавляют 4,0 мл 1 % раствора НКС.

Допускается хранение остатка 3 % суспензии диагностикума во флаконе при температуре от 2 до 10 °С в течение 24 ч.

1 % суспензия хранению не подлежит.

Приготовление 1 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов барана

Для контроля испытуемых сывороток на полноту удаления бараньих изоагглютининов готовят 1 % суспензию эритроцитов из 30 % суспензии акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана (30 % суспензию акролеинизированных или формалинизированных эритроцитов перед применением отмыть 2 раза 0,9 % раствором натрия хлорида). После тщательного встряхивания к 0,1 мл 30 % суспензии эритроцитов добавляют 2,9 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Для контроля 90 сывороток необходимо не более 2,5 мл 1 % суспензии эритроцитов.

Допускается хранение остатка 1 % суспензии эритроцитов при температуре от 2 до 10 °С не более 7 суток.

Подготовка сывороток

Приготовление испытуемых сывороток

Испытуемые сыворотки должны быть прозрачными, светлыми, без признаков бактериального пророста и гемолиза. До серологического исследования их хранят при температуре от 2 до 10 °С или в замороженном состоянии при температуре минус 15 °С и ниже. Исследуемые сыворотки разводят 0,9 % раствором натрия хлорида 1:5 (к 0,1 мл нативной сыворотки добавляют 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида), прогревают при температуре 56 ± 1 °С в течение 1 ч и истощают 30 % суспензией акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, которые перед этим тщательно встряхивают. 30 % суспензию эритроцитов добавляют в разведённую и прогретую сыворотку из расчёта 0,025 мл суспензии эритроцитов на 0,5 мл сыворотки, перемешивают и выдерживают при температуре 36 ± 1 °С в течение 1 ч или при температуре от 2 до 10 °С в течение 18 ч. Эритроциты осаждают центрифугированием при 1500 — 2000 об./мин. в течение 10 мин.

Читайте также:  Свечи от геморроя самые эффективные релиф

Приготовление положительного контроля – иммуноглобулина человека нормального

Иммуноглобулин человека нормальный разводят так же, как испытуемые сыворотки, — 1:5. Для этого из ампулы, содержащей иммуноглобулин, стерильно отбирают 0,1 мл и прибавляют к 0,4 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, получая, таким образом, рабочее разведение иммуноглобулина 1:5, которое используют в реакции без прогревания и обработки эритроцитами.

Неизрасходованный иммуноглобулин разливают стерильно по 0,1 мл и плотно закрывают пробками.

Допускается хранение разлитого по пробиркам иммуноглобулина при температуре от 2 до 10 °С не более 20 сут.

Постановка реакции

Для исследования 1 сыворотки используют 1 ряд лунок планшета.

В соответствии с количеством испытуемых сывороток в ряды планшета во все лунки многоканальной пипеткой вносят по 0,05 мл 1 % раствора НКС.

В первую и последнюю лунки каждого ряда вносят пипеткой по 0,05 мл подготовленных исследуемых сывороток и той же пипеткой, начиная с первой лунки, сыворотку перемешивают 5 раз и последовательно переносят во все лунки каждого ряда, кроме последней. Из последней лунки, в которой титровали сыворотку, удаляют 0,05 мл разведённой сыворотки. Разведение сывороток в первых и последних лунках получается, таким образом, 1:10.

Титрование иммуноглобулина человека нормального, входящего в комплект в качестве положительного контроля, производят точно так же, как испытуемых сывороток. Контроль иммуноглобулина ставят в 3-х параллельных рядах лунок планшета.

Во все лунки, кроме последней, каждого ряда многоканальной пипеткой вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии диагностикума коревого эритроцитарного антигенного.

Обязателен контроль исследуемой сыворотки на полноту удаления бараньих изоагглютининов. Для этого в последние лунки каждого ряда, где содержатся по 0,05 мл исследуемой обработанной и разведенной 1:10 сыворотки, вносят по 0,025 мл хорошо перемешанной 1 % суспензии эритроцитов барана, приготовленной из 30 % суспензии формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана.

Обязателен контроль КЭД на отсутствие его спонтанной агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки планшета вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии диагностикума.

Обязателен контроль акролеинизированных или формалинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана на отсутствие неспецифической агглютинации в 1 % растворе НКС. Для этого в 4 лунки вносят по 0,05 мл 1 % НКС и 0,025 мл 1 % суспензии несенсибилизированных эритроцитов.

Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 2 ч до полного оседания эритроцитов в контроле.

Учет результатов

Учет результатов проводят по условной шкале четырех крестов:

++++ (4+)- эритроциты образуют перевернутый «зонтик», края его опадают;
+++ (3+) — эритроциты образуют перевернутый «зонтик», края его ровные;
++ (2+) — по краю лунки намечается тонкое кольцо из эритроцитов;
+ (1+) — по краю лунки располагается широкое кольцо из эритроцитов;
(-) — эритроциты оседают на дне лунки в виде диска или кольца.

В последних лунках каждого ряда (контроль сыворотки), где добавлена 1 % суспензия формалинизированных или акролеинизированных несенсибилизированных эритроцитов барана, не должно быть агглютинации. При наличии агглютинации данная сыворотка должна быть повторно истощена.

В контрольных лунках с коревым эритроцитарным диагностикумом (контроль КЭД) в 1 % растворе НКС не должно быть агглютинации.

В контрольных лунках с акролеинизированными или формалинизированными несенсибилизированными эритроцитами в 1 % растворе НКС (контроль эритроцитов) не должно быть агглютинации.

Титром сыворотки или иммуноглобулина считают то последнее разведение, которое вызывает агглютинацию нагруженных коревым антигеном эритроцитов на два креста (++).

Сыворотки с титром 1:10 и выше расценивают как положительные.

При ретроспективной диагностике подтверждённым считают диагноз кори при наличии четырёхкратного и более нарастания титра антител при титровании парных сывороток: 1-ая из которых получена не позднее 3-го дня с момента появления сыпи, а 2-ая — через 3 недели после получения первой.

Титр коревых антител в иммуноглобулине человека нормальном (положительный контрольный образец) в РПГА должен соответствовать указанному на коробке комплекта с диагностикумом и выражен величиной разведения в МЕ/мл.

Титр коммерческих серий препарата иммуноглобулина устанавливают в Международных Единицах (МЕ).

Расчёт титра коревых антител в препаратах иммуноглобулинов в МЕ производят по следующей формуле:

Х = (а*с)/в, где:

Х — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине в МЕ;
а — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител в МЕ, указанный на этикетке коробки;
в — титр коревых антител в иммуноглобулине – положительном контрольном образце коревых антител, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте;
с — титр коревых антител в испытуемом иммуноглобулине, выраженный величиной обратной разведению, полученный в данном опыте.

Ссылка на основную публикацию
Эритематозный гастродуоденит лечение
Многие годы безуспешно боретесь с ГАСТРИТОМ и ЯЗВОЙ? «Вы будете поражены, насколько просто можно вылечить гастрит и язву просто принимая...
Эос угол альфа
ЭОС - суммарный вектор электродвижущей силы или деполяризации желудочков. Данное определение дано практически во всех пособиях по расшифровке кардиограмм. Оно...
Эпиген интим спрей отзывы
5 - 0 4 - 0 3 - 0 2 - 0 1 - 0 Хочу написать свою хвалебную оду...
Эритромицин акос мазь инструкция по применению
Erythromycin-akos, СИНТЕЗ ОАО (Россия) Внимаение! Препарат отпускается только по рецепту врача! Форма выпуска: мазь глазная 10 тыс.ЕД/1 г: тубы 3...
Adblock detector